تولید سلول های ناپذیرا برای مطالعه HIV-1 vif

سابقه و هدف: مولکول APOBEC3G ، به عنوان فاکتور سلولی دخیل در میانکنش با vif HIV-1 عمل می­کند که برای بررسی میانکنش آن با vif HIV-1 ، از سلول­های ناپذیرای طبیعی و ذاتی مثل H9 و PBMC انسانی مولد APOBEC3G استفاده می­شود. به دلیل ناکارآمدی آنها در این نوع بررسی­ها، نیازمند سلول­های ناپذیرایی بودیم که به طور ثابت و به میزان بالا تولید APOBEC3G بنماید. لذا از سلول­های 293T برای ایجاد این دسته از سلول­ها استفاده شد. مواد و روش­ها: از سلول­های 293T برای تولید سلول­های ناپذیرا ( non-permissive ) استفاده شد که این کار پس از ترانسفکشن با کلون­های مولکولی PcDNA-APO3G صورت گرفت و سپس با روش وسترن بلاتینگ، میزان بیان آنها بررسی شد. همچنین فعالیت رپلیکاسیون HIV-1 با استفاده از RT assay و عفونت­زایی آنها به وسیله MAGI assay بررسی شد. نتایج: در این مطالعه، تعدادی رده سلولی 293T ابرازکننده یک فاکتور انسانی ضد HIV-1 به نام APOBEC3G تهیه شد. به آسانی از طریق ایمونوبلاتینگ اثبات شد که چهار کلون از هفت کلون مورد بررسی، APOBEC3G را ابراز می­کنند. به ویژه مشخص شد که دو کلون (A3G-C1,A3G-C4) تولید مقادیر بالاتری از APOBEC3G را در مقایسه با کلون­های سلولی Pooled می­نماید. اثربخشی ترانسفکشن همه این کلون­ها مشابه سلول­های والد بود؛ با تولید سطح قابل قیاسی از ویریون­ها در نتیجه ترانسفکشن کلون­های DNA ویروسی نوع وحشی و vif منفی ( - vif ). به علاوه سطح ابرازی APOBEC3G در بهترین رده سلولی (A3G-C1) ، بسیار بالاتر از سطح ابرازی در یک رده سلولی لنفوسیتی APOBEC3G مثبت و سلول­های تک­هسته­ای خون محیطی بود. در نهایت دخول APOBEC3G در ویریون­های تولید شده در A3G-C1 مونیتور و پیگیری شد. APOBEC3G به راحتی در ذرات ویروسی پروژنی در نتیجه ترانسفکشن کلون پروویروسی vif منفی، و نه در کلون نوع وحشی، تشخیص داده شد. نتیجه­گیری: این نتایج مشخص ساختند که رده سلولی جدید تولید شده برای مطالعات مختلف بررسی میانکنش APOBEC3G انسانی و HIV-1 vif مفید است.